Trzy dodatkowe próbki miaÅ‚y pozytywne miana PRNT50 (tabela 2). Aby skorelować aktywność neutralizujÄ…cÄ… surowicÄ™ ze specyficznymi mianami przeciwciaÅ‚, przeprowadziliÅ›my zróżnicowane rekombinowane testy immunofluorescencyjne przeciwko wszystkim typowym HCoV we wszystkich próbkach z potwierdzonÄ… seropozytywnoÅ›ciÄ… stopnia 1. (Tabela 2). W parze surowicy dla Contact 180 wyniki testu rekombinacyjnej immunofluorescencji różnicowej wskazywaÅ‚y na znaczÄ…cy wzrost miana przeciwko MERS-CoV, ale nie przeciw żadnym z pozostaÅ‚ych badanych HCoV. Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 6”
Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 5
Dane laboratoryjne i historia 12 kontaktów domowych zidentyfikowanych jako majÄ…ce prawdopodobne wtórne zakażenie za pomocÄ… MERS-CoV. Wymazy z gardÅ‚a ze wszystkich domowych kontaktów zostaÅ‚y poczÄ…tkowo przebadane na obecność RNA MERS-CoV za pomocÄ… RT-PCR. SpoÅ›ród 280 kontaktów 7 (2%), które żyÅ‚y w trzech klastrach, miaÅ‚o podwójne pozytywne wyniki w RT-PCR (rysunek 1A). Poziomy RNA wirusa w wymazach uzyskanych z tych kontaktów wahaÅ‚y siÄ™ od mniej niż 500 kopii do 80 000 kopii na próbkÄ™ wymazu, przy medianie poziomu 2700 kopii na próbkÄ™ (Tabela 1). Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 5”
Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 4
Testowanie kopii zapasowej RT-PCR byÅ‚o oparte na drugim teÅ›cie RT-PCR, w tym re-ekstrakcji z oryginalnych próbek. Wyeluowany RNA przeszukiwano pod kÄ…tem regionu genomowego MERS-CoV powyżej genu otoczki (upE) i w otwartej ramce odczytu (ORF) 1a. Testowanie dla stopnia seropozytywnoÅ›ci wymagaÅ‚o zastosowania rekombinowanego testu immunofluorescencyjnego (rIFA) z peÅ‚nym spiczastym biaÅ‚kiem MERS-CoV (peÅ‚ne S) dla wszystkich próbek surowicy z dodatnim wynikiem na skriningu ELISA. Testowanie dla stopnia 2 seropozytywnoÅ›ci przeprowadzono na próbkach surowicy z poziomem seropozytywnoÅ›ci za pomocÄ… testowania neutralizacji pÅ‚ytek (PRNT), z redukcjÄ… pÅ‚ytki 50% jako kryterium dla aktywnoÅ›ci neutralizujÄ…cej. Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 4”
Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 3
Ponieważ białko wypustek CoV stanowi najbardziej swoisty i immunogenny antygen w testach z przeciwciałami CoV, 7 otwartych ramek odczytu dla pełnych białek szczytowych klonowano z ludzkich koronawirusów (HCoV) HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 i HCoV-HKU1, jak również dla koronawirusa zespołu ostrej niewydolności oddechowej (SARS-CoV) .6,8 Komórki dla wszystkich preparatów wysiewano na szkiełka mikroskopowe i transfekowano równolegle z równymi ilościami odpowiednich plazmidów ekspresyjnych.6,8 Aby porównać miana dla MERS- CoV z tymi dla różnych HCoV, testy immunofluorescencyjne były wykonywane przez tego samego członka personelu tego samego dnia. Kontrolne próbki surowicy do testów rekombinowanej immunofluorescencji HCoV uzyskano od pacjentów z niedawno potwierdzonym przez RT-PCR potwierdzeniem HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 lub HCoV-HKU1, jak widać w rutynowych testach diagnostycznych. Metody otrzymywania kontrolnych próbek surowicy do badań na obecność MERS-CoV i SARS-CoV opisano wcześniej .6,8-10 Test immunofluorescencyjny IgM
Test immunofluorescencji zastosowano do okreÅ›lenia obecnoÅ›ci przeciwciaÅ‚ IgM. Wszystkie próbki surowicy zostaÅ‚y pozbawione przeciwciaÅ‚ IgG przy użyciu odczynnika Eurosorb (Euroimmun), zgodnie z protokoÅ‚em. Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 3”