Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 6

Trzy dodatkowe próbki miały pozytywne miana PRNT50 (tabela 2). Aby skorelować aktywność neutralizującą surowicę ze specyficznymi mianami przeciwciał, przeprowadziliśmy zróżnicowane rekombinowane testy immunofluorescencyjne przeciwko wszystkim typowym HCoV we wszystkich próbkach z potwierdzoną seropozytywnością stopnia 1. (Tabela 2). W parze surowicy dla Contact 180 wyniki testu rekombinacyjnej immunofluorescencji różnicowej wskazywały na znaczący wzrost miana przeciwko MERS-CoV, ale nie przeciw żadnym z pozostałych badanych HCoV. Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 6”

Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 5

Dane laboratoryjne i historia 12 kontaktów domowych zidentyfikowanych jako mające prawdopodobne wtórne zakażenie za pomocą MERS-CoV. Wymazy z gardła ze wszystkich domowych kontaktów zostały początkowo przebadane na obecność RNA MERS-CoV za pomocą RT-PCR. Spośród 280 kontaktów 7 (2%), które żyły w trzech klastrach, miało podwójne pozytywne wyniki w RT-PCR (rysunek 1A). Poziomy RNA wirusa w wymazach uzyskanych z tych kontaktów wahały się od mniej niż 500 kopii do 80 000 kopii na próbkę wymazu, przy medianie poziomu 2700 kopii na próbkę (Tabela 1). Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 5”

Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 4

Testowanie kopii zapasowej RT-PCR było oparte na drugim teście RT-PCR, w tym re-ekstrakcji z oryginalnych próbek. Wyeluowany RNA przeszukiwano pod kątem regionu genomowego MERS-CoV powyżej genu otoczki (upE) i w otwartej ramce odczytu (ORF) 1a. Testowanie dla stopnia seropozytywności wymagało zastosowania rekombinowanego testu immunofluorescencyjnego (rIFA) z pełnym spiczastym białkiem MERS-CoV (pełne S) dla wszystkich próbek surowicy z dodatnim wynikiem na skriningu ELISA. Testowanie dla stopnia 2 seropozytywności przeprowadzono na próbkach surowicy z poziomem seropozytywności za pomocą testowania neutralizacji płytek (PRNT), z redukcją płytki 50% jako kryterium dla aktywności neutralizującej. Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 4”

Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 3

Ponieważ białko wypustek CoV stanowi najbardziej swoisty i immunogenny antygen w testach z przeciwciałami CoV, 7 otwartych ramek odczytu dla pełnych białek szczytowych klonowano z ludzkich koronawirusów (HCoV) HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 i HCoV-HKU1, jak również dla koronawirusa zespołu ostrej niewydolności oddechowej (SARS-CoV) .6,8 Komórki dla wszystkich preparatów wysiewano na szkiełka mikroskopowe i transfekowano równolegle z równymi ilościami odpowiednich plazmidów ekspresyjnych.6,8 Aby porównać miana dla MERS- CoV z tymi dla różnych HCoV, testy immunofluorescencyjne były wykonywane przez tego samego członka personelu tego samego dnia. Kontrolne próbki surowicy do testów rekombinowanej immunofluorescencji HCoV uzyskano od pacjentów z niedawno potwierdzonym przez RT-PCR potwierdzeniem HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 lub HCoV-HKU1, jak widać w rutynowych testach diagnostycznych. Metody otrzymywania kontrolnych próbek surowicy do badań na obecność MERS-CoV i SARS-CoV opisano wcześniej .6,8-10 Test immunofluorescencyjny IgM
Test immunofluorescencji zastosowano do określenia obecności przeciwciał IgM. Wszystkie próbki surowicy zostały pozbawione przeciwciał IgG przy użyciu odczynnika Eurosorb (Euroimmun), zgodnie z protokołem. Read more „Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 3”