Transmisja MERS-Coronavirus w kontaktach domowych AD 3

Ponieważ białko wypustek CoV stanowi najbardziej swoisty i immunogenny antygen w testach z przeciwciałami CoV, 7 otwartych ramek odczytu dla pełnych białek szczytowych klonowano z ludzkich koronawirusów (HCoV) HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 i HCoV-HKU1, jak również dla koronawirusa zespołu ostrej niewydolności oddechowej (SARS-CoV) .6,8 Komórki dla wszystkich preparatów wysiewano na szkiełka mikroskopowe i transfekowano równolegle z równymi ilościami odpowiednich plazmidów ekspresyjnych.6,8 Aby porównać miana dla MERS- CoV z tymi dla różnych HCoV, testy immunofluorescencyjne były wykonywane przez tego samego członka personelu tego samego dnia. Kontrolne próbki surowicy do testów rekombinowanej immunofluorescencji HCoV uzyskano od pacjentów z niedawno potwierdzonym przez RT-PCR potwierdzeniem HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43 lub HCoV-HKU1, jak widać w rutynowych testach diagnostycznych. Metody otrzymywania kontrolnych próbek surowicy do badań na obecność MERS-CoV i SARS-CoV opisano wcześniej .6,8-10 Test immunofluorescencyjny IgM
Test immunofluorescencji zastosowano do określenia obecności przeciwciał IgM. Wszystkie próbki surowicy zostały pozbawione przeciwciał IgG przy użyciu odczynnika Eurosorb (Euroimmun), zgodnie z protokołem. Rozcieńczenie przesiewowe wynosiło 1:40. Wtórną detekcję przeprowadzono przy użyciu skoniugowanych z izotiocyjanianem fluoresceiny (FITC) przeciwciał przeciwko ludzkim IgM.
Rekombinowany test ELISA
Rekombinowany test ELISA oparto na rozpuszczalnej domenie S1 białka spinki MES-CoV eksprymowanej w komórkach HEK-293T.11 Test ten został opracowany przy użyciu próbek otrzymanych z małych grup ludzi i wielbłądów w badaniach wstępnych.7,12 Rozcieńczenie Próbki ludzkiej surowicy w tym teście wynosiły 1: 100. Dodatkowe szczegóły techniczne znajdują się w sekcji Dodatku uzupełniającym, dostępnym wraz z pełnym tekstem tego artykułu na stronie.
Test neutralizacji
PRNT przeprowadzono w sposób opisany uprzednio.8. Rozcieńczenie wstępne w serii rozcieńczeń log2 wynosiło 1:10. Rozcieńczenia surowicy powodujące redukcję łysinek o 90% (PRNT90) i 50% (PRNT50) rejestrowano jako miana.
Algorytm diagnostyczny do identyfikacji transmisji wtórnej
Rysunek 1. Rysunek 1. Testy diagnostyczne wykonane w badaniu. Wymazy z gardła (kolumna A) i próbki surowicy (kolumna B) uzyskano z 280 kontaktów domowych 26 pacjentów z indeksem z zakażeniem MERS-CoV. Łącznie 44 domowe kontakty dostarczyły drugą próbkę surowicy do obserwacji (kolumna C). Badanie przesiewowe obejmowało badanie wszystkich wymazów z gardła za pomocą testu odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy (RT-PCR) i testowanie wszystkich próbek surowicy za pomocą rekombinowanego enzymatycznego testu immunoabsorpcyjnego (rELISA) z użyciem S1. domena białka kolczastego MERS-CoV [przypisy: skręcenie stawu skokowego, niacynamid, sprzątanie hal magazynowych ]

Powiązane tematy z artykułem: niacynamid skręcenie stawu skokowego sprzątanie hal magazynowych